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实验十六 维生素C的定量测定(26-二氯酚靛酚滴定法)

返回>来源:未知   发布时间:2019-08-17 07:36    关注度:

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  尝试十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)_其它测验_资历测验/认证_教育专区

  尝试十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)_其它测验_资历测验/认证_教育专区。维生素 C 的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法) 一、目标要求: (1)进修并控制用 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定动物材猜中维生素 C 含量的道理和方式。 (2)领会蔬菜、生果中维生素 C 含量环境

  维生素 C 的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法) 一、目标要求: (1)进修并控制用 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定动物材猜中维生素 C 含量的道理和方式。 (2)领会蔬菜、生果中维生素 C 含量环境。 (3)熟悉微量滴定法的根基操作过程。 二、尝试道理: 维生素 C 是人类养分中最主要的维生素之一,它与体内其它还原剂配合维持细胞一般 的氧化还原电势和相关酶系统的活性。维生素 C 能推进细胞间质的合成,若是人体缺乏维 生素 C 时则会呈现坏血病,因此维生素 C 又称为抗坏血酸。生果和蔬菜是人体抗坏血酸的 次要来历。分歧栽培前提、分歧成熟度和分歧的加工储藏方式,都能够影响生果、蔬菜的 抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是领会果蔬质量凹凸及其加工工艺成效的主要目标。 维生素 C 具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型。金属铜和酶(抗坏血酸氧化 酶)能够催化维生素 C 氧化为脱氢型。2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)是一种染料,在碱性溶 液中呈蓝色,在酸性溶液中呈 红色。抗坏血酸具有强还原性, 能使 2,6- 二氯酚靛酚还原褪 色,其反映如图: 当用 2,6-二氯酚靛酚滴定 含有抗坏血酸的酸性溶液时, 滴下的 2,6-二氯酚靛酚被还原 成无色;当溶液中的抗坏血酸 全数被氧化成脱氢抗坏血酸 时,滴入的 2,6-二氯酚靛酚立 即便溶液呈现红色。因而用这 种染料滴定抗坏血酸至溶液呈 淡红色即为滴定起点,按照染 料耗损量即可计较出样品中还 原型抗坏血酸的含量。 三、尝试材料、次要仪器和试剂: 1.尝试材料:多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等) 2.次要仪器: (1)天平 (2)研钵 1 (3)容量瓶(50mL) (4)刻度吸管(5mL,10mL) (5)锥形瓶(100mL) (7)漏斗 (8)脱脂纱布 (9)滤纸 (6)微量滴定管(3mL) 3.试剂: (1)2% HCl (2)尺度抗坏血酸溶液 切确称量抗坏血酸(应为纯洁色,如变为黄色则不克不及用) 25mg,溶于 25ml 4%HCl 中,移入 50ml 容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,贮于棕色瓶中, 冷藏,最好临用前配制,此溶液每 ml 中含抗坏血酸 0.5mg, 。 (3)0.01M 2,6-二氯酚靛酚 精确称 0.25g 氧化型 2,6-二氯酚靛酚、0.21g 碳酸 氢钠溶于 250ml 热蒸馏水中,稀释至 1000ml,充实振摇,装入棕色瓶内,置冰箱内留宿, 临用前过滤,用尺度 Vc 标定其浓度。置冰箱内冷藏(4℃)保留不得跨越 3 天(最长约可 保留一周) 。 四、操作方式: 一、尺度液滴定 取 5ml 尺度抗坏血酸,用 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定,以生成为微红持续 15 秒不退 为起点, 另取 5 2%HCl 作空白对照, 滴定。 计较 2,6-二氯酚靛酚溶液的浓度, 以每 ml 2,6 -二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的 mg 数来暗示。 二、提取 1.水洗清洁整株新颖蔬菜或整个新颖生果,用纱布或吸水纸吸干概况水分。每一样 品称取 10g 或 20g,放入研钵中,插手 2%HCl 一路研磨成匀浆,提取液通过 2 层纱布过滤 到 50ml 容量瓶中, 然后用 2%HCl 冲刷研钵及纱布 3-4 次, 最初用 2%HCl 稀释至刻度线.若是提取液含有色素,则倒入锥形瓶内插手 1 匙白陶土(高岭土) ,充实振荡 5 分钟,滤纸过滤,白陶土吸附生物样品中的色素,有益于起点的察看。 3.取三角锥形瓶两个,各加脱色的提取液 5 或 10ml,用 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定, 直至呈现微红色 30 秒不退色为起点。记实两次滴定的 ml 数,取平均值。滴定必需敏捷不 要跨越 2 分钟,由于在尝试前提下,一些非 Vc 的还原物质其还原感化较迟缓,快速滴定 能够避免或削减它们的影响。 4.另取 5 或 10ml 2%HCl 作空白对照,滴定。 5.按下式计较每 100g 样品中所含的 Vc 的毫克数。 维生素 C 含量(mg/100 g 样品)= (VA-VB)×C×T D×W ×100 式中:VA —— 滴定样品提取液耗损染料平均值(mL) VB —— 滴定空白耗损燃料的平均值(ml) C —— 样品提取液定容体积(50mL) T —— 每 mL 染料所能氧化抗坏血酸的 mg 数 2 D —— 滴按时吸收样品提取液体积(5 或 10mL) W —— 被检测样品的分量(5 或 10g) 【备注】 (1) 某些生果、蔬菜(如橘子、西红柿等)浆状物定容时泡沫太多,可加数滴丁醇或辛醇消泡。 (2) 样品的提取液制备和滴定过程,要避免阳光映照和与铜、铁器具接触,免得抗坏血酸被粉碎。 (3) 整个操作过程要敏捷,防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不跨越 2min。滴定所用的染 料不该小于 1ml 或多于 4ml, 若是样品含维生素 C 太高或太低时, 可酌情增减样液用量或改变提取液稀释 度。 (4) 本尝试必需在酸性前提下进行。在此前提下,干扰物反映进行得很慢。2% 盐酸有抑止抗坏血酸 氧化酶的感化. (5) 干扰滴定要素有: 若提取液中色素良多时,滴定不易看出颜色变化,可用白陶土脱色,或加 1ml 氯仿,达到起点时, 氯仿层呈现淡红色。 Fe 可还原二氯酚靛酚。对含有大量 Fe 的样品可用 8%乙酸溶液取代草酸溶液提取,此时 Fe 不会 很快与染料起感化。 样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚,但反映速度均较抗坏血酸慢,因此滴定起头时,染料要迅 速插手,尔后尽可能一点一点地插手,并要不竭地摇动三角瓶直至呈粉红色,于 15s 内不衰退为起点。 (6) 提取的浆状物如不易过滤,亦可离心,留取上清液进行滴定。 (7)市售 2,6-二氯酚靛酚质量纷歧,以标定 0.4mg 抗坏血酸耗损 2mL 摆布的染料为宜,可按照标 定成果调整染料溶液浓度。 2+ 2+ 2+ 五、思虑题 1.该法测定抗坏血酸有何不足? 2.用 2%盐酸提取样品的目标是什么? 参考谜底 1.用本法测定抗坏血酸含量虽简洁易行,能够一次测定大量的样品。但有下述错误谬误:第一,在生物 组织内和组织提取物内,抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及连系抗坏血酸的形式具有,本法只能测定还原 型抗坏血酸,不克不及测出具有同样心理功能的氧化型抗坏血酸和连系型抗坏血酸。第二,样品中的色素经 常干扰对起点的判断,可事后用白陶土脱色,或插手 2~3ml 二氯乙烷,以二氯乙烷层变红为起点。第三, 生物组织提取物和生物体液中常有其他还原性的物质, 此中有些也能够在同样前提下使 2,6-二氯酚靛酚 还原脱色。 2. 用 2%盐酸制备样品提取液, 可无效地抑止抗坏血酸氧化酶, 免得抗坏血酸为氧化型而无法滴定。 若是样品中有较多亚铁离子(Fe )时,亦会使染料还原而影响测定,这时应改为 8%乙酸制备样品提取 液。 成果阐发:( mg/100g ) 西红柿:14.96,15.84,10.12; 3 青椒:50.08,66.88,77.10,75.00; 2+ 苹果:0.7-43,大蒜:6.16,8.8,10.12; 西瓜肉:8.36; 大葱:12-13; 土豆:2-13; 豆角:18.48; 茄瓤:7.48; 桃:4.84; 豆芽:10; 4

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